|
|
 |
|
|
|
|
ЛАБОРАТОРИЯ ГЕННОЙ ТЕРАПИИ
Заведующий - проф. Р.И.Жданов
(12 научных сотрудников)
Основные направления:
- Создание генетических конструкций/плазмидных векторов, содержащих
функционально активные и регуляторные гены для генной терапии различных
патологий (диабет, опухоли, болезни печени и нервной системы);
- создание и исследование новых невирусных систем для адресной доставки
генов в эукариотические клетки (трансфекция с использованием катионных
и некатионных липосом);олигосахаридных векторов и других макромолекулярных
комплексов).
Основные результаты:
- Разрабатывается метод генной теpапии инсулин-зависимого диабета, обеспечивающий
созpевание инсулина в неэндокpинных клетках и основанный на использовании
бинаpной системы вектоpов, содеpжащей ген субтилизинподобной эндопpотеазы.
- Разработан метод для клонирования гена инсулина из тотальной ДНК
человека на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР). Проведено клонирование
гена инсулина в pGEM-3Z вектор с последующим субклонированием в NP-90 вектор
Xba 1 и BamHI участков для последующей экспрессии гена инсулина в неэндокринные
клетки.
- Найдены оптимальные условия для ПЦР-амплификации следовых количеств
ДНК.Созданы ДНК маркеры размеров аллелей (лэддеры) для четырех VNTR локусов
(apo B, pYNZ 22, D1S80, HIg), которые могут идентифицировать идентифицировать
число аллелей для этого локуса. Разpаботан метод очистки ДНК, экстрагиpованной
из pазличных биологических образцов.
- Установлены основные принципы взаимодействия нуклеиновых кислот с
фосфолипидными мембранами: взаимодействие липосом с нуклеиновыми кислотами
и ионами двухвалентных металлов (Ме) индуцирует образование новой фазы
в липидном бислое; ДНК/РНК действует как фактор слияния; только поверхностные
группы липидного бислоя участвуют во взаимодействии с Ме; результатом взаимодейс-
твия с липидными везикулами является резкая активация специфической и неспецифической
системы транскрипции.
- Найдены условия включения плазмидной ДНК (pEQ176, pCSEАP, pEQ-LacZ)
в фосфолипидные бислои, что защищает ее от действия ДНКазы, топоизомеpазы
I и от взаимодействия с флуоpесцентным красителем.
- Разработан эффективный оpигинальный метод для трансфекции клеток
эукаpиот в монослойной и суспензионной культуpах с помощью комплексов некатионных
липосом с плазмидной ДНК и Ме(П), а также с помощью катионных липосом,
содержащих олигосахаридные вектора и факторы слияния
Оборудование:
Laminar boxes, CO2 incubator, inverted microscope, DNA-amplificator (Termocycler), electrophoretic and other equipment for gene engineering and sequencing.
Основные публикации:
Zhdanov R.I., ed. (1992) BIOACTIVE SPIN LABELS, Springer, Berlin, Heidelberg, New-York, 640 p.p.
Towner R.A., Zhdanov R.I., Janzen E.G. (1993) Use of nitroxides as MRI contrast agents to study in vivo carbon tetrachloride induced hepatotoxicity in rats. FREE RAD. RES. COMMS., vol. 19,.p. S211-S218.
Zhdanov R.I. and Kuvichkin V.V. (1993) Membrane phospholipids act as DNA/RNA receptors during formation of specific DNA-nuclear membrane contacts and gene expression, in: NEW DEVELOPMENTS IN LIPID-PROTEIN INTERACTIONS AND RECEPTOR FUNCTION (Gustafsson J.A. and Wirtz K., eds.), Plenum, N.Y., 249-262.
Fedchenko V.I., Egorova A.V., Guriev S.O., Tyalina Yu.Yu., Pavlova G.V., Zhdanov R.I. (1994) Plasmid vector for human insulin gene expression in non-endocrine cells. BULL. EXPER. BIOL. MED., No 10, 440-443.
Zhdanov R.I., Kaptein R. (1994) Sequence-dependent DNA conformation and DNA-phospholipid recognition. APPL. MAGN. RESONANCE (Springer), vol.7, # 1, p. 1X-X11.
Zhdanov R.I., Volkova L.A., Kuvichkin V.V., Petrov A.I. (1994) Nucleic acid spin labeling study of the interaction between polyadenylic acid: polyuridilic acid duplex and egg phosphatidylcholine vesicles. APPL. MAGN. RESONANCE. vol.7, No 1, 115-130; 131-145.
Kovalenko D.V Borisenko A.S., Chafei R.A., Semenova M.L., Zelenina I.A., Zhdanov R.I (1996) Comparison of different methods of DNA transfection in vivo using techniques of direct injection in mouse muscles, RUSSIAN J. of GENETICS, vol. 42, No 9, p. 1299-1301.
Zhdanov R.I., Kutsenko N.G. and Fedchenko V.I. (1997) Non-viral gene transfer in gene therapy. VOPROSY MED.KHIMII, v.43, No 1, p.3-11.
Zhdanov R.I., Lavrenova T.P., Buneeva O.A., Tsvetkova T.A.,Serebrennikova G.A. and Maslov M.A (1997) New cationic glycoside liposomal vector for transfection into eukaryotic cells.VOPROSY MED. KHIMII. v.43, No 1, p. 11-15.
Zhdanov R.I., Buneeva O.A., Podobed O.V., Kutsenko N.G, Lavrenova T.P. (1997) Functional gene transfer into eukaryotic cells with neutral phospholipid liposomes. VOPROSY MED. KHIMII v. 43, No 2.
Zhdanov R. I., Podobed O. V., Buneeva O. A., Lavrenova T. P. et al. (1997) Lipofection using neutral liposomes conyaining surface oligosaccharide for targeted delivery of genes. KEYSTONE SYMPOSIUM ON MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY IN GENE THERAPY, Abstract book, # 107 and # 147.
Zhdanov R., Kutsenko N., Lavrenova T. et al. (1997) Functional gene transfer into fibroblast-like cells with new fusogenic cationic liposomes. CONGRESS OF MOLECULAR MEDICINE, Proceedings, Berlin, # 104.
Kutsenko N., Vlasov V., Konenets D., Podobed O., Buneeva O., Zhdanov R. (1997) Oligocholesteryl derivatives of polyetylenimine as a new type of lypopolycationic carriers for gene transfer and therapy, # 102.
Zhdanov R., Fedorov V., Kuvichkin V., Dyachkov P. (1997) DNA- phospholipiid membrane regognition. CONGRESS OF MOLECULAR MEDICINE, Proceedings, Berlin, # 4.